檢測技術服務:Co-IP實驗與Pull-down實驗有什么不同--檢測技術服務詳情

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免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法，用于確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用。Pull-down 技術又稱蛋白質體外結合實驗（Binding assay in vitro）， 是一種行之有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術，可用于初步研究兩種蛋白質互作分析。

Co-IP和Pull-down 均可用于檢測蛋白相互作用，兩者有很多相似之處，包括均能檢測兩種蛋白質之間強相互作用，但均只能進行定性分析而不能檢測瞬時相互作用，同時Co-IP和Pull-down在實驗原理及應用上也存在一定的區(qū)別。

Co-IP實驗與Pull-down 實驗有什么不同呢？Co-IP可用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合，以及確定某種特定蛋白質的新的相互作用蛋白，其實驗條件處于天然狀態(tài)下，因此可以反映出較為真實的蛋白質之間的相互作用。由于Co-IP沉淀下來的是蛋白復合物，在純化蛋白質復合物時，非特異性的粘附蛋白是不可避免的，所以不能直觀的顯示蛋白質之間的相互作用是直接還是間接的。

Pull-down在體外驗證兩種蛋白之間是否有相互作用，其可以去除其它蛋白的影響，可以明確目的蛋白和待檢測蛋白是否直接發(fā)生相互作用。由于Pull-down實驗條件是體外狀態(tài)而非體內自然狀態(tài)，無法得知體內真實的蛋白結合情況，因而可能會使實驗結果出現(xiàn)假陽性，例如可能是因為電荷作用的影響造成的吸附而不是生理性的相互作用。同時，Pull-down也可以對Co-IP實驗鑒定到的蛋白相互作用關系做進一步驗證。若將Co-IP/Pull-down技術與以LC-MS為基礎的蛋白質組學技術結合，通過一次實驗便能高通量的鑒定和篩選到多個與待研究的目的蛋白存在相互作用的蛋白質（蛋白質復合物組分）。

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